层析柱用途？
一、层析柱用途？
应用领域：
1、植物、中药有效成分地分离。
2、中药有效成分地精制。
3、中药中杂质的清除。
4、化工中间体、合成产品的纯化。
5、蛋白纯化、可以适配AKTA等蛋白纯化仪。
层析柱的装柱非常重要，装柱的效果会直接影响层析分离效果。有湿法装柱和干法装柱等两种方法。
湿法装柱很简单，使用也更普遍，就是先用比固定相多一倍的洗脱剂将固定相活成匀浆，柱子底部先用脱脂棉塞紧，然后倒入洗脱剂将脱脂棉中气泡赶出。用漏斗将活好的固定相倒入柱子中，打开底部活塞，将柱子中高出固定相的溶剂放出。期间不断用橡皮棒敲打，将固定相敲实， 做到密实均匀无气泡即可。很多时候用加压的方法可以很高效地装好柱子，而且在柱子中没有气泡产生。
二、层析柱填料是什么？
常用液相色谱填料的粒径有：1.8um、3um、5um，这些一般是用在分析柱上的。
还有：10um、15um、20um、40um这些一般是用在制备色谱柱上的。
三、层析柱有气泡怎么处理？
可以用适量的有机溶剂润洗一下层析柱，柱子体积较小的话就用玻璃棒搅匀排除一下气泡。
不管是干柱和湿柱，都要加层析液，不能要求一开始就没有气泡的。要用洗脱剂不停的洗脱，就是用配置好的试剂一边一边对柱子进行洗脱，这样不但可以消除气泡，还可以使硅胶充分沉降，让层析效果更好。等柱子没有气泡后在上样用洗脱液进行层析。
四、重力型层析柱如何使用？
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中，于105C活化2H后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵人溶剂，至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量丙酮溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人石油醚1000RID。
3.洗脱
以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2~ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC检识展开剂丙酮一(2:8)，显色剂5%香草醛浓硫酸乙醇液
至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量甲醇热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。
4.层析柱再生、平衡
有效成分经TLC检识全部流出后，用纯丙酮5000ML再生，丙酮一石油醚(5:95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2-6个月以上)。
5.重结晶
冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，然后用少量甲醇洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。将冬凌草甲素再用适量甲醇热溶后放置，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6.薄层层析分析
取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品甲醇溶解后点于同一硅胶G薄层板上，以一丙酮(8:2)为展开剂进行展开，5% 香草醛浓硫酸乙醇液显色，于105。C烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的RF值，并呈现出同样的蓝绿色斑点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。
五、层析柱柱体积如何计算？
柱体积就是根据层析柱内径和长度求出，你内径有了，长度应该是13cm，这样就好算了。给你一个估计的方法：柱体积=填充物质量（g）×2
六、层析柱和色谱柱的区别？
1、压力
液相色谱柱（尤其是分析性高效液相色谱）：压力较高，一般为10-20Mpa
层析柱：一般为常压，或使用真空泵（0.1Mpa左右）
2、填料
液相色谱柱：粒径较小（常规5-20um)
层析柱:粒径较大
3、分离度
由第二项决定，粒径越小，单位长度下理论塔板数越高
液相色谱柱：分离度比层析柱好
4、效率
液相色谱柱：分离速度快，一般在一小时内
层析柱:分离时间长，一小时以上。
七、层析柱中固定相如何选择？
柱层析原理:柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离.一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附.当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱；吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱.硅胶柱层析流动相：极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸一般都是利用极性相似相容原理,看流动相与固定相的极性,大部分是固定相的极性小于流动相,然后流动相的极性与所要洗脱的物质极性比较接近,从而将物质洗脱下来.
八、亲和层析柱类型有哪些？
亲和层析(affinitychromatography)指的是利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。
亲和层析(Affinity Chromatography)是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。
人们很早就认识到蛋白质、酶等生物大分子物质能和某些相对应的分子专一而可逆的结合，可以用于对生物分子的分离纯化。
但由于技术上的限制，主要是没有合适的固定配体的方法，所以在实验中没有广泛的应用。直到60年代末，溴化氰活化多糖凝胶并偶联蛋白质技术的出现，解决了配体固定化的问题，使得亲和层析技术得到了快速的发展。
亲和层析是分离纯化蛋白质、酶等生物大分子最为特异而有效的层析技术，分离过程简单、快速，具有很高的分辨率，在生物分离中有广泛的应用。同时它也可以用于某些生物大分子结构和功能的研究。
九、普通玻璃层析柱流速怎么控制？
在比较不同内径柱子的结果时经常会用线性速度（cm/h），平时的流速一般用体积流速（ml/min）计算 从线性速度到体积流速： 体积流速=线性流速/60×层析柱的横截面积 比如内直径1.6厘米的层析柱，线性流速是30cm/h 则体积流速=30×3.14×1.6×1.6/(60×4)=1.0ml/min 从体积流速到线性流速： 线性流速=体积流速×60/层析柱的横截面积 比如内直径1.6厘米的层析柱，体积流速是1ml/min 则线性流速=1×60×4/(3.14×1.6×1.6)=29.9cm/h
十、层析柱原理和使用方法？
一，原理
柱层析操作时，先在圆柱管中填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。
柱层析法
二，使用方法
从天然产物中提取、分离和表征生物小分子，是新药研发中获得先导化合物的主要途径之一。层析法（Chromatography）是天然产物分离较为常用的方法之一。 层析法较早是根据化合物颜色分离一些植物色素，如今，层析法已经演变成为一种高度敏感的、有效的化合物分离和鉴定方法。柱层析一般包括常压柱层析、中压柱层析和高压柱层析。按照柱填料又可分为柱层析硅胶、离子交换层析、凝胶渗透色谱、疏水作用色谱等，其中以柱层析硅胶（正/反相）使用较为为广泛。与其他层析方法相比，柱层析具有操作简单，经济实惠 ，样品承载量大等优点，是天然产物分离纯化的方法之一。
